紫外衍生化方法
使用液相色譜最多的是紫外檢測器，為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測，往往要通過衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)。這些衍生物可被紫外檢測器檢測。
大多數(shù)紫外衍生反應(yīng)來自經(jīng)典的廣度分析和有機(jī)定量分析，新的衍生化反應(yīng)和衍生試劑隨液相色譜的發(fā)展而發(fā)展，這些反應(yīng)的原理都來自有機(jī)合成，所以就要求操作者對有機(jī)合成有所了解。但是，由于柱前衍生化是為色譜分析準(zhǔn)備樣品，需要衍生處理的樣品的含量水平和所參與的衍生化反應(yīng)過程與常量有機(jī)合成反應(yīng)相比有著明顯的不同，而是類似于近年來發(fā)展的微量有機(jī)合成，紫外衍生化反應(yīng)要求選擇反應(yīng)產(chǎn)率高、重復(fù)性好的反應(yīng)。過量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果會干擾下一步的色譜分離和檢測，則在色譜進(jìn)樣前要進(jìn)行純化分離。還要注意反應(yīng)介質(zhì)對紫外吸收的影響。下面分別介紹一些常用的反應(yīng)。
(1)苯甲酰化反應(yīng) 苯甲酰氯及其衍生物一對硝基苯甲酰氯，3，5-二硝基苯甲酰氯和對甲氧摹苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng)，生成強(qiáng)紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物，過量試劑可以通過水解除去，反應(yīng)產(chǎn)物可用有機(jī)溶劑提取后直接進(jìn)樣。
(2) 2，4-二硝基氟代苯 (DNFB) 的反應(yīng) DNFB與醇的反應(yīng)產(chǎn)率很低，但可與大多
數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反應(yīng)，生成強(qiáng)紫外吸收的苯胺類衍生物。
(3) 苯基異硫氰酸酯 (PITC) 的反應(yīng) PITC可與氨基酸反應(yīng)，生成苯基己內(nèi)酰硫脲衍生物PTH-氨基酸。
苯基異氰酸酯與醇類反應(yīng)生成苯基甲酸酯。
(4) 苯基磺酰氯的反應(yīng) 苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應(yīng)。
甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反應(yīng)，不僅能提高其檢測是敏度，還可改變HPLC的分離度。
(5) 有機(jī)酸的酯化反應(yīng) 有機(jī)酸很容易與酰溴基反應(yīng)生成酯，常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰演、對溴基苯甲酰溴和對硝基苯甲酰溴等。酯化反應(yīng)在極性溶劑(如乙腈、丙酮或四氫呋喃)中進(jìn)行，有時(shí)需加催化劑，如冠醚加鉀離子、三乙胺或N-二異丙基胺等。
(6) 羰基化合物的反應(yīng) 醛類和酮類中的羰基可與2，4-二硝基苯肼 (DNPH) 反應(yīng)， 生成苯腙衍生物，反應(yīng)在弱酸條件下進(jìn)行。
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